微透析技术的一些常见问题答疑
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作者:康森特生物科技
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发布时间: 2024-01-26
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微透析 (Microdialysis)技术是一种将灌流取样和透析技术结合起来并逐渐完善的一种从生物活体内进行动态微量生化取样的新技术。
微透析 (Microdialysis)技术是一种将灌流取样和透析技术结合起来并逐渐完善的一种从生物活体内进行动态微量生化取样的新技术。
某一特定物质的回收率定义为透析液中的浓度与组织液中浓度的百分比。当流速接近零时，相对回收率将接近 100%，并随着流速的增加而降低，它通常以百分比表示。绝对回收率定义为在规定的时间段内回收的物质的质量。当流速为零时，它也为零，在较高流速时将达到最大值。
物质从组织中的绝对回收率（mol/时间单位）取决于（1）透析膜的“截留”（通常定义为 80% 的分子无法通过膜的道尔顿分子量）,（2）膜的长度和直径,（3）灌注液的流速 （4）化合物通过细胞外液的扩散系数。（5）其他因素，如培养基的pH值、物质的降解也可能影响回收率。对于从探针进入组织的物质来说，情况正好相反。
理想情况下，灌注液应尽可能接近细胞外液的成分。不过可通过改变钠、钾或钙的浓度，来改变所研究部位膜的功能。CMA 产品有外周组织灌流液 T1和中枢神经系统脑组织灌流液。
为了与脑组织液具有相同的pH 值，中枢神经系统灌流液是非缓冲溶液。故其 pH 值在 5-8 之间。
由于中枢神经系统灌流液无缓冲作用，所以它不会影响组织的pH。灌流液的pH值与周围组织的pH值相同。但是，膜对组织中的缓冲物质的回收率不同，会对组织的pH 产生较小的影响。
如果要在单位时间内去除或引入尽可能多的分子，应使用高流速。若想获得高浓度的透析液（高回收率），应使用低流速。但需要注意的是低流速收集的透析液体积较小，因此在设定流速时还要考虑分析样本所需用的体积。
将探针植入组织总是会造成一定的伤害，细胞功能也不会立即恢复。通常灌流一个小时可达到“基线条件”。
如果探针的截留量是20,000 Da,为什么分子量是20,000 Da的物质的回收率不是100%？分子通过膜的能力随着分子量的增加呈对数递减。根据经验可得知，当使用截留量20,000 Da的膜时，大多数分子量高达5,000 Da的物质都可以进行透析。这种情况完全依赖于分析方法的实准确性和灵敏度。
可能是未将正在使用的注射器校准泵。注射器可能泄漏，或者没有使用 CMA 配套的注射器。
探针漏液，管路被堵塞，泵可能出了问题，或者管路接头漏液。
回收率的浓度永远不会与您在培养基中看到的相似。除非您的介质和灌注液之间完全平衡，否则透析液中给定物质的浓度将低于其在溶液中的实际浓度。这同样适用于体内和原位实验。
透析液与组织（或溶液）浓度之间的关系称为“相对回收率”，定义为透析液/间质浓度比值，以百分比表示：
相对回收率= Cmd/Cint=1-exp-K0 A/F
其中 Cmd 和 Cint 分别是微透析液和间质（组织或溶液）中分析物的浓度，K0 是平均传质，A 是膜表面，F 是透析液流速。
综上所述，增加膜表面或降低流速会得到更高的相对回收率以及膜孔径大小。然而，由于微透析膜上没有完全的平衡，透析液中被测物质的浓度永远不会等于真正的间质浓度。
如果您需要知道间质浓度，可以使用其他方法进行计算，例如无净通量法。
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